| Riassunto in italiano |
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Gli adenovirus del cane sono una delle principali cause di malattia in cani, coyote, volpi rosse e lupi, così come in altri carnivori e mammiferi marini. Canine adenovirus type 1 ( CadV-1) e Canine adenovirus type 2 (CAdV-2) causano rispettivamente l’epatite infettiva del cane (ICH) e la tracheobronchite infettiva (ITB). Nello studio oggetto della presente tesi, è stata sviluppata una duplex real-time PCR per la simultanea rilevazione e caratterizzazione di CAdV-1 e CAdV-2, utilizzando una singola coppia di primer e sonde virus-specifiche. Il test è stato convalidato mediante l’analisi di DNA standard e campioni clinici risultati precedentemente positivi per CAdV-1, CAdV-2, o entrambi i virus. Il calcolo preciso delle quantità di DNA virale in campioni contenenti una vasta gamma di titoli virali è stato possibile generando una curva standard per la quantificazione assoluta. Il test si è dimostrato altamente specifico, dal momento che non è stata osservata nessuna reazione crociata con i diversi tipi di CAdV, ma anche molto sensibile, essendo in grado di rilevare meno di 10 copie di DNA di CAdV-1/CAdV-2. I bassi coefficienti di variazione intra-assay e inter-assay hanno dimostrato un’elevata ripetibilità, confermando così l’utilizzo potenziale di questo test per la rilevazione quantitativa di CAdV-1 e CAdV-2 per diagnosi e indagini epidemiologiche rapid
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| Abstract in inglese |
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Canine adenoviruses represent a major cause of disease in dogs, coyotes, red foxes and wolves, as well as in other carnivores and marine mammals. Canine adenovirus type 1 (CAdV-1) and canine adenovirus type 2 (CAdV-2) cause infectious canine hepatitis (ICH) and infectious tracheobronchitis (ITB), respectively. In this study, a duplex real-time PCR assay for simultaneous detection and characterisation of CAdV-1 and CAdV-2 was developed by using a single primer pair and virus-specific probes. The assay was validated testing standard DNAs produced on purpose and clinical samples of various matrices known to be positive for CAdV-1, CAdV-2 or both. Precise calculation of DNA loads in samples containing a wide range of viral amounts was allowed by generating a standard curve for absolute quantification. The assay was proven to be highly specific, since no cross-reactions with the different CAdV type was observed, and sensitive, being able to detect less than 10 copies of CAdV-1/CAdV-2 DNA. The low intra-assay and inter-assay coefficient of use of this assay for variations demonstrated a high repeatability, thus confirming the potential quantitative detection of CAdV-1 and CAdV-2 for rapid diagnosis and epidemiological investigations
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